Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga

Krapić, Mia

prikaz prve stranice dokumenta Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga

Download
PDF 1.38 MB

master's thesis

Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga

Rijeka: University of Rijeka, 2018. urn:nbn:hr:193:633677

Krapić, Mia

University of Rijeka
Department of Biotechnology

Cite this document

APA 6th Edition

Krapić, M. (2018). Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga (Master's thesis). Retrieved from https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:633677

MLA 8th Edition

Krapić, Mia. "Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga." Master's thesis, University of Rijeka, 2018. https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:633677

Chicago 17th Edition

Harvard

Krapić, M. (2018). 'Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga', Master's thesis, University of Rijeka, accessed 28 March 2023, https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:633677

Vancouver

Krapić M. Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga [Master's thesis]. Rijeka: University of Rijeka; 2018 [cited 2023 March 28] Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:633677

IEEE

M. Krapić, "Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga", Master's thesis, University of Rijeka, Rijeka, 2018. Available at: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:633677

Cite this item: https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:193:633677

Please login to the repository to save this object to your list.

Metadata

Title	Kromatografska izolacija izvanstaničnih vezikula iz cerebrospinalne tekućine bolesnika s teškom ozljedom mozga
Title (english)	Size-exclusion chromatography-based isolation of extracellular vesicles from cerebrospinal fluid of patients with severe traumatic brain injury
Author	Mia Krapić
Mentor	Kristina Grabušić (mentor)
Committee member	Mladenka Malenica Staver (predsjednik povjerenstva)
Committee member	Miranda Mladinić Pejatović (član povjerenstva)
Committee member	Kristina Grabušić (član povjerenstva)
Granter	University of Rijeka (Department of Biotechnology) Rijeka
Defense date and country	2018-09-27, Croatia
Scientific / art field, discipline and subdiscipline	BIOTECHNICAL SCIENCES Biotechnology
Abstract	Severe traumatic brain injury (TBI) is intracranial damage caused by external force and is the leading cause of death and disability among young people. The damage to brain tissue involves a complex and mostly long-lasting cascade of pathological processes such as inflammation, excitotoxicity and apoptosis, which are targeted for management during the critical care. Although a full recovery after severe TBI is possible, the mechanisms of neuroregeneration and thus targeted measures to support neuro-recovery are unknown. However, intercellular communication between neurons and glia cells is cellular activity vital for the renewal of old synapses and establishment of new ones. Newly described potential mediators of intercellular communication in the brain are extracellular vesicles (EVs). EVs are nanosized particles enveloped with phospholipid bilayer and capable of transporting proteins, lipids and nucleic acids between cells. The previous study discovered that cerebrospinal fluid (CSF) of patients with severe TBI shows dynamic changes in both physical properties of EVs and levels of neuroregeneration-associated proteins. This EV dynamics indicates possible neuro-recovery response of the brain. The goal of this research was to enable analysis of EV-proteome by isolating total EVs from clinical CSFs after severe TBI. An in-house size-exclusion chromatography (SEC) based on sepharose CL-6B was developed in this work and used it to separate total EVs from CSF pools of 6 control patients and 6 severe TBI patients. After collection, SEC fractions were characterised by 3 independent methods: immunoblot analysis for CD9 protein (i) and acetylcholinesterase (AChE) assay (ii) as well-established EV protein markers and Bradford assay (iii) to determine the total protein concentration. These quantifications of SEC fractions resulted in partially overlapping curves with AChE and CD9 peaks detected in earlier fractions than III total protein peak. The results indicate a successful separation of EVs from soluble proteins enabling the proteome analysis by mass spectrometry.
Abstract (croatian)	Teška traumatska ozljeda mozga je intrakranijalno oštećenje uzrokovano vanjskom silom te je vodeći uzrok smrtnosti i invaliditeta u mladih ljudi. Ozljeda moždanog tkiva uključuje složenu i dugotrajnu kaskadu patoloških procesa poput upale, ekscitotoksičnosti i apoptoze, a liječenje bolesnika u kritičnom stanju je usmjereno na ublažavanje tih negativnih procesa. Iako je potpuni oporavak nakon ozljede moguć, mehanizmi neuroregeneracije kao i potencijalne mjere koje bi je poticale još uvijek nisu otkrivene. Međutim, oporavak starih sinapsi i stvaranje novih ovisi o međustaničnoj komunikaciji između neurona i glija stanica. Novi potencijalni posrednici međustanične komunikacije u mozgu su izvanstanične vezikule (IV). IV su nanočestice obavijene fosfolipidnom membranom i mogu prenositi lipide, proteine i nukleinske kiseline između stanica. U prethodnom istraživanju pokazalo se da u cerebrospinalnoj tekućini pacijenata s teškom traumatskom ozljedom mozga dolazi do dinamičnih promjena fizikalnih svojstava IV-a i razina proteina uključenih u neuroregeneraciju. Te promjene ukazuju na moguće procese neuroregeneracije. Cilj ovog istraživanja bio je izolirati ukupne IV iz kliničkih uzoraka cerebrospinalne tekućine nakon teške traumatske ozljede mozga i time omogućiti analizu njihova proteoma. Kromatografska metoda na bazi sefaroze CL-6B razvijena je tijekom ovog rada i primijenjena za razdvajanje ukupnih IV-a iz cerebrospinalne tekućine 6 kontrolnih i 6 bolesnika s teškom traumatskom ozljedom mozga. Sakupljene kromatografske frakcije karakterizirane su pomoću 3 metode: imunoblot analizom za CD9 protein (i), esejem za acetilkolinesteraznu aktivnost (AChE) (ii), koji su poznati proteinski markeri IV-a te Bradford esejem (iii) kojim se odredila koncentracija ukupnih proteina. Kvantifikacija frakcija rezultirala je krivuljama koje su se djelomično preklapale. Vrhovi krivulja AChE i CD9 V detektirani su u ranijim frakcijama u odnosu na ukupne proteine. Rezultati ukazuju na uspješno razdvajanje IV-a od solubilnih proteina čime je omogućena njihova daljnja proteomska analiza masenom spektrometrijom.
Keywords
Keywords (croatian)
Language	english
URN:NBN	urn:nbn:hr:193:633677
Study programme	Title: Biotechnology in medicine Study programme type: university Study level: graduate Academic / professional title: magistar/magistra biotehnologije u medicini (magistar/magistra biotehnologije u medicini)
Type of resource	Text
File origin	Born digital
Access conditions	Open access Embargo expiration date: 2020-06-01
Terms of use
Repository	Repository of the University of Rijeka, Department of Biotechnology
Created on	2018-10-31 09:40:55